Desarrollo y validación de métodos analíticos para la cuantificación de antifúngicos triazólicos en muestras preclínicas y clínicas

Resumen

Los triazoles sistémicos forman parte del arsenal terapéutico. Los antifúngicos del grupo de los triazoles se han convertido en fármacos de primera línea para el tratamiento y profilaxis de muchas micosis sistémicas. Este grupo muestra peculiaridades farmacocinéticas, lo que hace que estos agentes sean firmes candidatos a la monitorización terapéutica. El trabajo de tesis desarrollado persigue implementar métodos analíticos válidos basados en cromatografía líquida de alta eficacia y en métodos microbiológicos para la cuantificación de itraconazol, voriconazol y posaconazol. Estos métodos se han desarrollado y validado para su aplicación en pacientes tratados, así como aplicación en modelos animales de infección. Los métodos cromatográficos desarrollados son métodos rápidos, fiables, reproducibles. Los métodos microbiológicos desarrollados y validados son precisos, exactos y rápidos. Demuestran ser fiables, precisos y baratos. El modelo invertebrado ha mostrado ser válido para estudios de virulencia y actividad antimicrobiana y corrobora que la patogenicidad de cepas de A. fumigatus con resistencia a azoles no se ve afectada por la adquisición de mecanismos de resistencia. El perfil de exposición de posaconazol y voriconazol fue comparable al obtenido previamente tanto en sujetos sanos como en receptores de trasplante de células hematopoyéticas. En el modelo de rata en el que se utilizó posaconazol como profilaxis, se observó que la exposición al fármaco era similar en los dos grupos de animales, tanto en el grupo de los infectados por la cepa resistente como los infectados por la cepa sensible. Los resultados confirmaron la eficacia de un régimen de profilaxis a dosis superiores con la cepa de A. fumigatus susceptible, mientras que con la cepa resistente, las diferentes dosis administradas no mostraron eficacia alguna y no fueron capaces de frenar la progresión de la infección. Demostró la utilidad de la carga fúngica y el índice de galactomanano para hacer el seguimiento de la progresión de la infección fúngica o la monitorización de la eficacia del tratamiento. Posaconazol distribuye muy bien a pulmones, donde la cantidad cuantificada es superior a la de suero. Las concentraciones analizadas aumentaban en función de la dosis administrada. Se observaron unos ratios de concentraciones mayores en pulmón que en suero. En el estudio en pacientes tratados con voriconazol, destaca la variabilidad de concentraciones séricas de voriconazol observadas en la población en estudio. Una vez alcanzados niveles terapéuticos, estos no se mantienen dentro del rango terapéutico en posteriores determinaciones. Los métodos analíticos han sido desarrollados y validados siguiendo los parámetros exigidos en las guías para la validación de métodos bioanalíticos de la Food and Drug Administration y la European Medicines Agency. Los métodos desarrollados y validados cumplen con los criterios de precisión y exactitud, así como con el resto de parámetros exigidos en los procesos de validación de métodos bioanalíticos, con lo que los métodos presentados son fiables y reproducibles. La determinación de los niveles de voriconazol, posaconazol e itraconazol, muestran que las concentraciones séricas de los tres fármacos en los diferentes pacientes y en las diferentes muestras obtenidas de cada uno de ellos son muy variables, lo que unido a las características farmacocinéticas complejas justifican la monitorización de las concentraciones séricas de los tres fármacos. En ambos modelos animales se establece una buena correlación in vivo in vitro para ambos antifúngicos y se establece la validez de ambos modelos animales para la determinación de parámetros farmacocinéticos y la traslación del conocimiento adquirido al ser humano. La evaluación de la utilidad de la monitorización de voriconazol en pacientes en tratamiento muestra conclusiones interesantes que son corroboradas por publicaciones tanto previas como posteriores.