Procesamiento proteolítico del factor de transcripción pacc en aspergillus nidulans

Resum

En Aspergillus nidulans la regulación de la expresión génica por el pH ambiental está mediada por PacC. PacC es un factor de transcripción con tres dedos de zinc de tipo Cys2His2 que puede detectarse en tres forma fisiolólogicas mayoritarias: PacC72 (72 kDa), PacC53 (53 kDa) y PacC27 (27kDa). A pH ácido PaC se encuentra en su forma inactiva PacC72. La alcalinización del medio activa la ruta pal que transduce la señal de pH alcalino y activa a PacC mediante dos pasos proteolígicos secuenciales. El primero de ellos, denominado corte señalizador, es dependiente de pH y de la ruta pal, elimina aproximadamente 180 residuos del extremo C-terminal de PacC y rinde PacC53. PacC53 es substrato de la proteasa procesativa que, de manera pH y ruta pal independiente, lleva a cabo el segundo paso proteolítico (el corte procesativo) que rinde la forma transcripcionalmente activa de PacC, PacC27. Datos previos en nuestro laboratorio apuntan al proteasoma como posible candidato a ser la proteasa procesativa de PacC. En este trabajo se demuestra que PalB, la única proteasas de la ruta pal, no es la proteasas procesativa. Hemos demostrado que la NLS2 bipartita de PacC es funcional y se han utilizado versiones mutantes de PacC, deficientes en transporte nuclear, cuyo procesamiento revela que, al igual que el proteasoma, la proteasa procesativa es capaz de actuar tanto en el citoplasma como en el núcleo. Hemos caracterizado el gen preB, el ortólogo de PRE2 en A.nidulans, que codifica para la subunidad beta5 del proteasoma (responsable de la actividad quimotripsina). Hemos construido, por reemplazamiento génico, dos mutaciones missense en preB: preB1 K334A y preB2 K33R. PreB1 es letal. preB2 es viable pero impide el crecimiento a pH alcalino o en neomicina, es criosensible e hipersenible a molibdato sódico. Las cepas preB2 son deficientes en actividad quimotripsina y acumulan NimE Ciclína B, un substrato natural del proteasoma. Los niveles de PacC, sin embar