Dinámica e identidad de membranas del sistema endosomal de "Aspergillus nidulans"

Resum

Las hifas de hongos filamentosos crecen exclusivamente mediante extensión apical. Las grandes distancias que se generan entre el ¿tip¿, donde predominan la secreción y la endocitosis, y otras regiones de la célula, imponen unos requerimientos especia les a la maquinaria del tráfico intracelular, en la que el citoesqueleto de microtúbulos juega un papel esencial. La familia Rab es, junto con las Arf, la clase principal de GTPasas monoméricas que contribuyen en la determinación de la identidad de l os orgánulos. Se consideran una especie de interruptores moleculares que se encuentran en las células en dos formas distintas: una forma activa, cuando están unidas a GTP, y otra inactiva, en la que están unidas a GDP. En su forma activa se asocian a membranas a través de grupos hidrofóbicos geranil-geranilo, mientras que en su forma inactiva son generalmente citosólicas. Estas características les permiten reclutar ¿efectores¿, proteínas de membrana periféricas sólo cuando se asocian a membranas específicas. Las GTPasas del grupo Rab5 se han asociado clásicamente con endosomas tempranos (EEs) y vesículas de clatrina que se internalizan desde la membrana plasmática, con la fusión homotípica de endosomas y con la biogénesis de endosomas y vac uolas. Rab7, tanto en levaduras como en mamíferos, se encuentra en la membrana de las vacuolas/lisosomas, donde regula los eventos de fusión de las vacuolas entre sí, con vesículas procedentes del Golgi y con endosomas tardíos (LEs), a través del rec lutamiento del complejo de ¿tethering¿ HOPS. En los últimos años se ha descrito que, una vez que los endosomas adquieren un cierto grado de maduración, Rab7 sustituye a Rab5 y CORVET es reemplazado por HOPS, lo que facilita la fusión con las vacuolas . En Aspergillus nidulans, una de las dos proteínas parálogas de Rab5, RabA, unida a GFP se localiza en puntos citosólicos que se mueven bidireccionalmente sobre microtúbulos (MTs) a una velocidad de 2-3 micras/s. Dicha localización es dependiente d e la Ser29 de RabA, ya que RabAS29N (mutación que provoca que dicha Rab se encuentre constantemente unida a GDP y, por tanto, en su conformación inactiva), es citosólica. Las estructuras GFP-RabA tienen identidad de endosomas tempranos (EEs), ya que colocalizan de manera predominante con las estructuras mótiles marcadas con FM4-64 (un fluoróforo que se une a los fosfolípidos de membrana) a tiempos tempranos después de la carga del fluoróforo. La evidencia de que los EEs de A. nidulans se mueven