Aspectos bioquímicos y moleculares del enraizamiento in vitro de brotes con características juveniles y adultas de "Quercus robur"

Résumé

El objetivo general de esta tesis consiste en determinar los posibles cambios a nivel bioquímico y molecular que puedan estar relacionados con la pérdida de la capacidad de enraizamiento que se produce en el material adulto de roble (Quercus robur L.). Para ello se utilizan cultivos in vitro de brotes de dos líneas de roble de diferente estado ontogenético; una derivada de renuevos basales, de carácter juvenil y que presenta altas tasas de enraizamiento y otra derivada de ramas de la copa, con carácter adulto y con baja o nula capacidad de formación de raíces adventicias. Ambas líneas son del mismo genotipo ya que que proceden de un mismo espécimen de 300 años de edad. Los análisis realizados han sido: A,- La evaluación de las principales características morfológicas y fisiológicas que distinguen los dos tipos de material al final de la fase de multiplicación. B,- La cuantificación de los niveles endógenos de auxinas (AIA, ácido indol-3-acético, y AIA-Asp, ácido indol-3-acetil-aspártico) durante los primeros 8 días del proceso de enraizamiento inducido con ácido indol-3-butírico (AIB) así como la evaluación del efecto del NPA (ácido naftil-p-talámico) sobre el enraizamiento y sobre los niveles endógenos de auxinas. C,- El análisis de los niveles de expresión durante el enraizamiento de un cDNA (QRCPE) identificado en roble y que se expresa preferentemente en cultivos de material adulto. Estudio del efecto del NPA sobre los niveles de expresión. Los resultados obtenidos indican que en este clon de roble pueden utilizarse diferentes parámetros morfológicos referidos al tallo y las hojas como marcadores asociados al cambio de fase. Además, la línea procedente de renuevos basales presenta mayor número de brotes enraizables (mayor 20mm) y elevados porcentajes de enraizamiento mientras que los brotes procedentes de las ramas de la copa no enraízan. Estas características fisiológicas se han mant