Aislamiento y expresión en saccharomyces cerevisiae de genes de schwanniomyces castellii que determinan alfa-amilasas y resistencia a cicloheximida

Abstract

EL SISTEMA AMILOLITICO DE SW. CASTELLII INCLUYE, AL MENOS DOS ENZIMAS DIFERENTES CON ACTIVIDAD ALFA-AMILASA. LOS GENES SWA1 Y SWA2, DETERMINANTES DE AMBOS ENZIMAS, HAN SIDO AISLADOS Y EXPRESADOS EN S. CEREVISIAE. SE HA COMPROBADO QUE, EN ESTE ORGANISMO, LA TRANSCRIPCION DE LOS DOS GENES CON SUS PROPIOS PROMOTORES ES BAJA. EN CAMBIO, LA EXPORTACION DE LOS RESPECTIVOS PRODUCTOS GENICOS ES CORRECTA. SE HA AISLADO EL PROMOTOR DE SWA1. ESTO HA PERMITIDO COMPROBAR QUE ES FUNCIONAL BIDIRECCIONALMENTE EN S. CEREVISIAE. ADEMAS SE HA DETERMINADO SU SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS, COMPROBANDOSE QUE NO PRESENTA HOMOLOGIAS CON LAS SECUENCIAS DE PROMOTORES DE S. CEREVISIAE. ESTO EXPLICA LA ESCASA ACTIVIDAD DEL PROMOTOR EN ESTA LEVADURA. SW. CASTELLII PRESENTA RESISTENCIA A CONCENTRACIONES MUY ELEVADAS DE CICLOHEXIMIDA, MIENTRAS QUE S. CEREVISIAE ES SENSIBLE AL ANTIBIOTICO. SE HAN AISLADO, A PARTIR DEL GENOMIO DE SW. CASTELLII, DOS GENES QUE DETERMINAN EN S. CEREVISIAE RESISTENCIA A CICLOHEXIMIDA. AMBOS GENES PUEDEN UTILIZARSE COMO MARCADORES DE SELECCION EN VECTORES PARA S. CEREVISIAE. SE HAN SEPARADO LOS CROMOSOMAS DE SW. CASTELLII MEDIANTE ELECTROFORESIS EN CAMPO PULSADO HEXAGONAL. SE HA COMPROBADO QUE EL GENOMIO DE ESTA LEVADURA SE COMPONE DE, AL MENOS, OCHO CROMOSOMAS, Y SE HA COMENZADO A ESTABLECER SU MAPA GENETICO MEDIANTE LA LOCALIZACION DE LOS GENES SWA1 Y SCR2 EN LOS CROMOSOMAS III Y VI, RESPECTIVAMENTE.