Inducción transcripcional del gen de la sintasa endotelial del óxido nítrico y formación de peroxinítrito en el endotelio vascular en respuesta a Ciclosporina A

Résumé

Aunque la CsA ha supuesto un avance importante en el campo del transplante de órganos, produce efectos secundarios para los que se han propuesto numerosos mediadores, sin que ninguno de ello explique completamente la toxicidad observada. En la fisiopatología de estos efectos secundarios se ha sugerido la participación de las especies reactivas del oxígeno y del nitrógeno. El aumento de la expresión de la sintasa endotelial del NO (eNOS) en el endotelilo producido por la CsA y su dependencia de la formación de especies reactivas del oxígeno (ROS) había sido previamente documentado por nuestro grupo. Pero se desconocian el mecanismo molecular implicado y las especies reactivas concretas que podrían estar generándose en el endotelio en respuesta a la CsA. La capacidad oxidante de la CsA en un contexto extravascular también había sido sugerida por otros autores, sin embargo, la naturaleza química de las especies reactivas producidas por la CsA no era conocida. Detectamos que el mecanismo fundamental por el que la CsA aumenta la expresión del ARNm de la eNOS es un aumento de la tasa de transcripción del gen eNOS. Esta conclusión se fundamenta en que tanto el bloqueo farmacológico de la transcripción produce prácticamente la abolición del aumento de expresión, como en ensayos de transcripción in vitro de núcleos aislados de CEAB tratadas con CA y en ensayos de actividad del promotor humano de la eNOS transfectado en CEAB. En esta inducción transcripcional del gen eNOS por la CsA participa el factor transcripcional AP-1, ya que hay pérdida de la transactivación del promotor del gen eNOS en CEAB tratadas con CsA cuando a estr promotor se le muta el sitio AP-1 situado a -662 pares de bases desde el inicio de la transcripción. En concordancia con ello, la CsA aumenta la expresión del ARNm del gen c-fos, la presencia de la proteína c-Fos en el núcleo, y la actividad de unión del complejo AP-1 a la secuencia en ci