The role of dkk-3 in retinoic acid induced neuronal differentiation of ntera-2 cells

Abstract

La vía de señalización de Wnt juega un papel importante en numerosos procesos entre los que seencuentra la regulación de la proliferación y la diferenciación celular en distintos tejidos así como tieneun papel fundamental durante el desarrollo embrionario. Esta vía está regulada por varias familias deantagonistas entre las que se encuentran las proteínas relacionadas con la familia de Frizzled (sFRP) y lafamilia de Dickkopf (Dkk). Dkk-3 es un mediador que regula indirectamente la de la vía de Wnt. En losúltimos años su función se ha asociado a la regulación de la morfogénesis. Esta tesis se centra en elestudio de los mecanismos de regulación y de la función de Dkk-3 en la diferenciación neuronal tomandocomo modelo experimental la línea de células madre de teratocarcinoma NTERA-2 (NT2). Losexperimentos realizados en esta tesis han demostrado que durante la diferenciación inducida por ácidoretinóico se produce un incremento de la expresión de Dkk-3. Los experimentos de silenciamiento génicomediante el uso de shRNAs revelaron que la disminución de la expresión endógena de Dkk-3 producíauna inhibición de la diferenciación neuronal en células cultivadas en presencia de ácido retinóico.También se observaron cambios a nivel de adhesión celular en las células transfectadas con Dkk-3shRNA. Además el estudió de modelos de cultivos celulares tridimensionales mostró que la disminuciónde la expresión endógena de Dkk-3, que fueron analizados mediante métodos de análisis de imágenesmicroscópicas, daba lugar a una inhibición del efecto del ácido retinóico en las neurosferas derivadas decélulas transfectadas con shRNA. Así mismo, con el fin de estudiar el efecto de la expresión ectópica deDkk-3, se llevó a cabo la purificación de la proteína recombinante a partir de medio condicionado decélulas HEK293 que expresaban de manera constitutiva Dkk-3, pero la cantidad de proteína obtenida fueinsuficiente a cabo estudios funcionales. Por esta razón, se estudió el efecto de la sobreexpresión de Dkk-3 en la vía de señalización de Jak/STA T, que ha sido postulada como una de las posibles vías deseñalización sujetas a una regulación directa por Dkk-3. Los resultados obtenidos en esta tesis relacionanla función de Dkk-3 con la diferenciación inducida por ácido retinóico en las células NT2. Dkk-3favorecería la diferenciación de dichas células que ocurren en fases tempranas del tratamiento y quefavorecen la diferenciación neuronal inducida por ácido retinóico en las células de teratocarc