Desarrollo de nuevas metodologías para la enumeración de células en cultivo y la cuantificación de la apoptosis

  1. DÍAZ MARTÍN, DAVID
Supervised by:
  1. Melchor Álvarez de Mon Soto Director
  2. Alfredo Prieto Martín Co-director
  3. Jorge Monserrat Sanz Co-director

Defence university: Universidad de Alcalá

Fecha de defensa: 12 December 2006

Committee:
  1. María Julia Araceli Buján Varela Chair
  2. Eduardo Reyes Martín Secretary
  3. José Antonio Girón González Committee member
  4. Antonio de la Hera Martínez Committee member
  5. Alberto Orfao Committee member
Department:
  1. Medicina y Especialidades Médicas

Type: Thesis

Teseo: 146981 DIALNET

Abstract

Los estándares internos han sido utilizados en métodos de citometría de fuljo para enumerar subpoblaciones linfoides y progenitores hematopoieticos ex vivo. Sin embargo, los métodos actualmente disponibles no pueden ser realmente aplicados al análisis de células cultivadas debido a la existencia de muerte celular durante ensayos, in vitro. Materiales y Métodos: Esta tesis propone un nuevo método para la enumeración de células viables y no viables y de células proliferantes y no proliferantes en cultivo. Las células fueron cuantificadas mediante un estándar interno de referencia de micropartículas y la discriminación entre células viables y no viables se realizó mediante el marcaje doble con anexina V y 7- aminoactinomicina que permite el marcaje doble de antígenos de superficie. .Resultados: El método es más preciso, exacto y sensible que la microscopía óptica convencional y los contadores celulares automáticos. Además, puede ser utilizado para medir exactamente el numero de células apoptóticas en un cultivo celular heterogéneo. Conclusiones: El método de enumeración celular ratiométrico por citometría de flujo desarrollado en esta tesis es más exacto, preciso y sensible que la microscopia óptica convencional y los contadores celulares automáticos y permite la definición del inmunofenotipo de las poblaciones celulares en un cultivocelular heterogéneo.