Desarrollo de herramientas y técnicas de genética molecular para identificar y estudiar genes esenciales en Aspergillus fumigatus

Résumé

La elevada tasa de mortalidad y enorme prevalencia de las infecciones causadas por A. fumigatus, especialmente para la aspergilosis invasiva (AI), demuestran la gran importancia que este patógeno oportunista de humanos presenta en la medicina actual. El descubrimiento de nuevas dianas terapéuticas a través de la identificación de genes esenciales en A. fumigatus es, posiblemente, la línea de investigación más directa y racional hacia el desarrollo de antifúngicos altamente eficaces para el tratamiento de la AI, y por extensión, de otras micosis sistémicas. Sin embargo, hasta esta Tesis no existía ninguna metodología que permitiera identificar dichos genes esenciales. En este trabajo de investigación se han desarrollado distintas herramientas de genética molecular para el análisis funcional en A. fumigatus. De ellas se destacan: (1) la clonación de dos genes esenciales, nudC y cam, de A. fumigatus, que han sido utilizados como reporteros en el segundo objetivo de esta Tesis. (2) La validación de los genes sC de A. nidulans y pyr-4 de N. crassa como marcadores de transformación heterólogos en A. fumigatus y (3) la construcción de una cepa ¿sC de A. fumigatus que facilita la realización de importantes técnicas de genómica funcional en este microorganismo. El segundo objetivo de esta Tesis Doctoral ha consistido en el desarrollo, a nivel mundial, del primer sistema de expresión condicional que permite identificar y validar genes esenciales en A. fumigatus. Dicho sistema se basa en el promotor alcAp de A. nidulans, el cual permite inequívocamente la validación de genes esenciales como los genes nudC y cam empleados como reporteros en este trabajo. Adicionalmente, se exploró la capacidad de otro promotor altamente regulable, el promotor alcCp de A. fumigatus para identificar genes esenciales en este microorganismo patógeno. Los resultados obtenidos indican también la validez de este segundo sistema analizado en la identificación de genes esenciales en A. fumigatus.