Busqueda en Streptomyces 1326 de nuevas secuencias génicas implicadas en la producción de Xilanasas mediante mutagénesis por transposición

Résumé

El objetivo general de la Tesis se enmarca en la búsqueda de secuencias génicas implicadas en la producción de xilanasas por el actinomiceto Streptomyces lividans. De esta forma se pretende disponer en el futuro de cepas sobreproductoras de dichas enzimas, o que sean capaces de producir diferentes combinaciones de las mismas, de acuerdo con la aplicación a la que se destinen. Para la consecución del objetivo propuesto, se ha construido una colección de mutantes mediante mutagénesis por transposición en S. lividans, detectándose las posibles alteraciones en la producción de xilanasas al crecer las cepas en medios sólidos que contenían xilano o xilano más glucosa como fuentes de carbono. Una vez seleccionados cinco mutantes, se cuantificó la producción de la actividad xilanasa en medios líquidos, y se analizó la composición del complejo xilanolítico mediante zimogramas. Por último, se ha pretendido caracterizar, mediante su clonaje, secuenciación y análisis en las bases de datos, las secuencias ADN genómico que flanquean a las inserciones del transposón en las cepas mutantes. Para el clonaje de las secuencias flanqueantes se han utilizado técnicas basadas en restricciones del ADN genómicos, que al incluir dichas secuencias y parte del transposón que codifica para resistencias a antibióticos, permitiera su clonaje mediante una selección adecuada. Otra de las técnicas empleadas ha sido la PCR mediada por ligación. De esta última forma, se ha caracterizado en uno de los mutantes la zona de ADN genómico donde se ha insertado el transposón, alterando la producción de xilanasas. Esta zona incluye una proteína integral de membrana y una proteína reguladora. Este tipo de proteínas son similares a otras descritas en diferentes microorganismos, y pueden actuar regulando la secreción de enzimas extracelulares. Es la primera vez que se describen dichas proteínas en Streptomyces.