Procesamiento de transcritos y control de la expresión de genes ndh de cloroplastos

Resumen

En el genoma de cloroplastos se ha descrito la presencia de 11 genes que codifican para polipéptidos como homología a los correspondientes del complejo I de mitocondrias. Son los denominados genes ndh. Este hecho sugería la existencia de un complejo NAD(P)H-deshidrogenosa que podría participar en clorrespiración. En plantas superiores estos genes se transcriben muy activamente y algunos de ellos sufren procesamientos psot-transcripcionales como: corte del transcrito, splicing y editing, para dar lugar al transcrito maduro susceptible de ser traducido. Seis de los 11 genes ndh identificados en el genoma de cloroplastos estan situados en la región SSC del genoma y se transcriben como una unidad transcipcional, junto con el gen psaC (operon ndhH-ndhD). Por ensayos de Westem blot hemos identificado la presencia del polipéptido NDHA en nuestras condiciones de cultivo de cebada hemos secuenciado 8.125 nucleótidos entre los que se encuentra el opero completo, la secuencia la depositamos en el Banco de Secuencias EMBL/GeneBanck/DDBJ con los números de Acceso AJ001848 yHVU011848. Igualmente se ha descrito pro primera vez la existencia de un punto de editing en el transcrito del gen ndhD de cebada. Ensayos de Northen blot con sondas, cien por cien homólogas, correspondientes para los distintos ndh de lo perón, nos han permitido identificar al menos 22 transcritos diferentes en distinto grado de maduración, entre ellos hemos identificado los correspondientes transcritos maduros así como el intrón (libre de los dos exones) correspondiente al gen ndh-a. Para poder estudiar en que etapa del procesamiento tienen lugar el splicing y el editing, hemos tenido que poner a punto una técnica novedosa que nos ha permitido aislar los transcritos ocurre en las primeras etapas de la maduración salvo para el caso del punto III, (situado en el segundo exón del gen ndhA) que no tiene lugar hasta que ha ocurrido el splicing. El intrón del ndhA es típico de tipo II de auto-splicing, presentando los 6 domínios característicos asi como las secuencias consenso de la zona catalítica y la de unión de los extremos 5' y 3' de intron. La configuración secundaria que adquiere el intrón cuando está unido al segundo exónno permite la actuación de la maquinaria de edición sobre el punto III, quedando en cambio accesible cuando se ha perdido el intrón.