Caracterización a nivel genético, bioquímico y ultraestructural de los peroxisomas y su biogénesis en Aspergillus nidulans

Résumé

En el presente trabajo se han realizado estudios genéticos, bioquímicos y ultraestructurales para determinar la función fisiológica de los peroxisomas y su biogénesis en el hongo filamentoso Aspergillus nidulans. A. nidulans posee un sistema de Beta-oxidación inducible por acetato y en mayor medida por ácido oleico. El crecimiento en presencia de acetato y sobre todo de ácido oleico induce la proliferación masiva de los peroxisomas de A.nidulans, proceso que ha sido empleado para estudiar y caracterizar la biogénesis de estos orgánulos en este hongo filamentoso. Mediante estudios de fraccionamiento subcelular, citoquímicos e inmunocitoquímicos se ha demostrado que las enzimas de la Beta-oxidación de ácidos grasos, catalasa y las enzimas claves del ciclo de glioxílico, isocitrato liasa y malato sintetasa, se localizan en los peroxisomas de A.nidulans, el único tipo de microcuerpos existente en este microorganismo. Los peroxisomas de A.nidulans conservan la maquinaria para el transporte de las proteínas a la matriz peroxisomal dependiente de secuencias señales PTS1 y PTS2. Utilizando el método de selección positiva del 3-aminotriazol se ha aislado una colección de 40 mutantes ole de A.nidulans que definen cinco genes nucleares denominacos oleA, oleB, oleC, oleD y oleE. Mutaciones en dichos genes impiden la utilización de fuentes de carbono cuyo metabolismo ocurre en peroxisomas. La mutación oleE21 define un nuevo gen ole/acu en A.nidulans, localizado en el cromosoma I de este hongo filamentoso. La caracterización bioquímica y ultraestructural del mutante oleE21 demuestran que esta cepa es deficiente en biogénesis de peroxisomas y supone la identificación del primer gen en A.nidulans implicado en este proceso, al que hemos denominado perA. Mutantes oleA y oleC son deficientes en las enzimas peroxisomales carnitin-acetil-trasferasa y malato sintetasa, respectivamente. Las deficiencias en los