Análisis de los dominios funcionales de la RNA helicasa CI del virus de la sharka

Zusammenfassung

Se ha clonado, expresado y purificado en bacteria la proteina ci del virus de la sharka, la cual es una rna helicasa. Se ha obtenido dicha proteina con actividad helicasa in vitro. Se han efectuado deleciones de su secuencia y ensayado las proteinas obtenidas. Se ha puesto de manifiesto la importancia de la region carboxilo terminal de la proteina en el mantenimiento de su actividad helicasa. Se han localizado dos dominios de union a rna en la secuencia de la ci, uno de ellos asociado al dominio vi de helicasas, y el otro en la region amino, en torno al dominio ia. Ademas se ha mutagenizado la region correspondiente al dominio v de helicasas, y se ha demostrado su implicacion en la actividad atpasa de la proteina. Se han inoculado plantas y protoplastos con transcritos de rna del genoma completo del virus, y portando las mutaciones introducidas en dicha secuencia del domino v, las cuales se ha determinado que afectan a la capacidad del virus de establecer una infeccion normal en la planta, de manera que cuando la proteina ci pierde su actividad helicasa, total o parcialmente, el genoma viral no puede replicarse convenientemente en la celula infectada, de manera que solo se observa replicacion a un nivel muy reducido, o no se observa en absoluto. Asi, el virus no es capaz de infectar la planta completa. Esto demuestra la implicacion de la proteina ci en la replicacion del genoma viral, aunque no descarte que pueda estar implicada en otros procesos, como el transporte del virus de una celula infectada a otra.