Detección molecular de Rickettsia sp y diversos hemoparásitos en artrópodos recogidos de animales silvestres en la provincia de Burgos, España

Résumé

INTRODUCCIÓN: Durante los últimos años ha aumentado la incidencia de muchas zoonosis transmitidas por vectores artrópodos (Oteo and Blanco.. 2006).Así, tanto bacterias como hemoparásitos han sido propuestos como agentes causantes de diversas enfermedades emergentes: 1) Las rickettsias se transmiten a través de garrapatas, pulgas, piojos y ácaros. 2) Hemoparásitos como Babesia spp y Theileria spp, se transmiten por mordedura de garrapatas loxidae ( Blaschitzer al.. 2008) y 3) Hepatozoon spp tiene un ciclo que incluye hospedadores tales como garrapatas, piojos, pulgas o mosquitos. Debido a que en España se dispone de datos limitados sobre la prevalencia de la infección por rickettsias y estos hemoparásitos en artrópodos, se realizó un estudio epizootiológico con el fin de detectar y caracterizar bacterias patógenas y protozoos en artrópodos de animales silvestres en la provincia de Burgos. La información detallada relativa a los vectores, hospedadores y reservorios será esencial para aplicar futuras medidas de control (Torina d al. 2007).MATERIAL Y MÉTODOS: Área de estudio. El ludio se ha llevado a cabo en la provincia de Burgos. Noroeste de España (42° 55 ·52'"N, 3 º 29' 2"W). Es una zona rural en la que recientemente se observa un aumento del número de personas que acceden a realizar actividades de recreo.Muestras. Cuarenta y dos animales silvestres (pertenecientes a 13 especies) fueron capturados y examinados para detectar rickettsias y hemoparásitos (Piroplasmida yHepatozoon) durante el periodo comprendido entre junio de 2006 y septiembre de 2007. Lo animales silvestres procedían bien de accidentes de tráfico o bien fueron atrapados vivos. En ambos casos se obtuvieron los ectoparásitos, los cuales fueron identificados, y mantenidos en tubos estériles en alcohol al 70% hasta su posterior procesamiento.Extracción de ADN, PCR y secuenciación. El ADN de los artrópodos se extrajo según el método de Shouls et al. (1999). Así, el AD del género Rickettsia fue detectado por amplificación de la citrato sintetasa (gltA) utilizando varios primers (RPCS 1258/RpCs 87, Rr l 90.70p/Rr ( Regnery el al. 1993), así como de genes ompB utilizando primers ( l 20-M59'/ l 20 -807) (Roux y Raoul t. 2000). Piroplasmidos como Babesia sp y Theileria sp se detectaron mediante los primers Universal-Babesia Theileria BTI-F/BTI-R que amplifican el gen rRNA 18s (Criado-Fornelio el al. 2006). Para la detección de Hepatozoon spp. se emplearon los primers HEPl /HEP 4 (dirigidos al gen 18S rR A - Criado-Fornelio el al. 2006). En todos los experimentos se incluyeron los correspondientes controles. En las muestras positivas, se realizó la purificación de los productos amplificados con el kit de purificación QIAquick spin-PCR de Qiagen (Hílden, GmbH, Alemania) y se analizaron las secuencias utilizando un secuenciador automático ABI (Applied Biosyste111s. Foster City. CA. EE.UU). Las secuencias fueron modificados mediante el software Lasergene (DNASTAR, inc., Madison, EE.UU.) y la homología de las búsquedas se compararon con sus correspondientes secuencias de otras especies de rickettsias, Babesia y Hepatozoon disponibles en la base de datos del GenBank/EMBL, utilizando el soflware BLAST (Burland 2000).RESULTADOS Y CONCLUSIONES: Los resultados muestran la detección de Babesia microti en una garrapata (Ixodes ricinus) recogida en ratones silvestres (Apodemus sylvaticus) y Theíleria annae en lxodes hexagonuss obtenida del zorro rojo (Vulpes vulpes). Asimismo. se identificó Hepatozoon sp en 2 pulgas (C, Ctenophthalmus sp, así como en un pool de Ceratophyllus sciurorum recogidas de un topillo y una ardilla, respectivamente). Rickettsias felis fue encontrada en dos pulgas, identificadas como Ctenocephalides felis de dos martas (Martes foina). Esta es la primera vez que se comunica la presencia de Hepatozoon sp en ácaros (Neotrombicula sp ), obtenidos a partir de topillo (Clethryonomis glareolus); también se ha encontrado por primera vez Rickettsia felis en la pulga Ctenocephalides felis, obtenida de una marta (Martes foina). Nuestros resultados sugieren la existencia de un el riesgo potencial de las infecciones transmitidas por artrópodos en la provincia de Burgos, e indican la necesidad de tener en cuenta estos vectores como posibles transmisores de patógenos tanto animales como humanos. (Resumen completo publicado en: Acta parasitologica portuguesa v.16, (1-2)-Adenda: 74-75, ISSN 0872-5292)