PROCEDIMIENTO MINIATURIZADO EN PLACAS MULTIPOCILLO PARA ANALIZAR LA UNIÓN DE LIGANDOS A ÁCIDOS NUCLEICOS MEDIANTE LA OBTENCIÓN DE CURVAS DE FUSIÓN TÉRMICA.

Resum

Procedimiento miniaturizado en placas multipocillo para analizar la unión de ligandos a ácidos nucleicos mediante la obtención de curvas de fusión térmica.

Se describe un procedimiento miniaturizado en placas multipocillo para analizar la unión de ligandos a ácidos nucleicos mediante curvas de fusión térmica. Para conseguir la miniaturización se utilizan estrategias de marcaje fluorescente que permitan la determinación de la proporción de complejos asociados y disociados en fase homogénea. Las mezclas de reacción a analizar se disponen en distintos pocillos de una placa multipocillo. A continuación se somete la placa a un incremento de temperatura gradual programado en el tiempo, tomando lecturas de intensidad de fluorescencia de cada pocillo tras cada paso de incremento de temperatura. Puede ejecutarse también un programa de disminución gradual de temperatura, igualmente tomando lecturas de intensidad de fluorescencia con cada cambio. El cambio programado de temperatura y lectura de intensidad de emisión de fluorescencia se puede realizar en un aparato de PCR de tiempo real u otros equipos que permitan realizar dichas operaciones sobre placas multipocillo.