PROCEDIMIENTO DE CUANTIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS MEDIANTE AMPLIFICACION POR REACCION EN CADENA DE LIGASA COMPETITIVA.

Resumen

Procedimiento de cuantificación de ácidos nucleicos mediante amplificación por reacción en cadena de ligasa competitiva, basado en la co-amplificación de un segmento do ácido nucleico analito y un segmento de ácido nucleico patrón intrínsecamente ajeno a la muestra que contiene el analito, siendo dicha co- amplificación realizada mediante una reacción en cadena de ligasa (LCR) en la que intervienen seis oligonuceótidos ligando, A1, A2, P1, P2, C1 y C2, siendo el analito amplificado por el cuarteto formado por los ligandos A1, A2, C1 y C2, y el patrón amplificado por el cuarteto P1, P2, C1 y C2, siendo A1 y A2 ligandos específicos y exclusivos del analito, P1 y P2 ligandos específicos y exclusivos del patrón, y C1 y C2 ligandos específicos de forma común para el analito y el patrón, de forma que durante el proceso de amplificación se establece una competición por la unión de los ligandos C1 y C2 entre el analito y el patrón, o sus respectivos productos de amplificación. La cuantificación delanalito se consigue añadiendo una cantidad conocida del patrón a una alícuota de la muestra que se sospecha que contiene dicho analito, realizando una LCR con los ligandos A1, A2, P1, P2, C1 y C2, cuantificando los productos de amplificación del analito y del patrón, y deduciendo la cantidad de analito presente en la muestra inicial a partir de las cantidades relativas de dichos productos de amplificación.