Desarrollo de nuevas metodologías para la enumeración de células en cultivo y la cuantificación de la apoptosis

  1. DÍAZ MARTÍN, DAVID
Dirigida por:
  1. Melchor Álvarez de Mon Soto Director
  2. Alfredo Prieto Martín Codirector
  3. Jorge Monserrat Sanz Codirector

Universidad de defensa: Universidad de Alcalá

Fecha de defensa: 12 de diciembre de 2006

Tribunal:
  1. María Julia Araceli Buján Varela Presidenta
  2. Eduardo Reyes Martín Secretario/a
  3. José Antonio Girón González Vocal
  4. Antonio de la Hera Martínez Vocal
  5. Alberto Orfao Vocal
Departamento:
  1. Medicina y Especialidades Médicas

Tipo: Tesis

Teseo: 146981 DIALNET

Resumen

Los estándares internos han sido utilizados en métodos de citometría de fuljo para enumerar subpoblaciones linfoides y progenitores hematopoieticos ex vivo. Sin embargo, los métodos actualmente disponibles no pueden ser realmente aplicados al análisis de células cultivadas debido a la existencia de muerte celular durante ensayos, in vitro. Materiales y Métodos: Esta tesis propone un nuevo método para la enumeración de células viables y no viables y de células proliferantes y no proliferantes en cultivo. Las células fueron cuantificadas mediante un estándar interno de referencia de micropartículas y la discriminación entre células viables y no viables se realizó mediante el marcaje doble con anexina V y 7- aminoactinomicina que permite el marcaje doble de antígenos de superficie. .Resultados: El método es más preciso, exacto y sensible que la microscopía óptica convencional y los contadores celulares automáticos. Además, puede ser utilizado para medir exactamente el numero de células apoptóticas en un cultivo celular heterogéneo. Conclusiones: El método de enumeración celular ratiométrico por citometría de flujo desarrollado en esta tesis es más exacto, preciso y sensible que la microscopia óptica convencional y los contadores celulares automáticos y permite la definición del inmunofenotipo de las poblaciones celulares en un cultivocelular heterogéneo.